病理技术作为病理学的支撑,是病理诊断的基础。病理技术是病理工作中的重要组成部分,它贯穿从接收标本到发放病理报告整个诊断流程的始终。病理技术工作的质量直接影响到病理医生的诊断以及患者的诊断治疗效果,因此高质量的病理技术工作就显得尤为重要。
一、对送检组织标本的要求
送检组织标本在手术切除或活检后应当立即放入10%中性缓冲福尔马林溶液中固定。尸检标本应当尽量在死亡后尽早取材固定。送检组织需要全部取材的,应当在送检单上注明,有特殊要求(如细菌培养、解释道化学分析等)应当事先联系,并且在标本未固定前进行处理。
二、组织取材要求
在对送检组织标本进行详细检查的基础上,根据诊断的需要,确定取材的部位和块数。切取的组织应当按照不同的部位分别给予不同的编号或标记,以便镜检时核对。另外,尽可能在取材前对有意义的标本的表面及剖面镜下摄影,并编号存档。
三、活检标本取材要求
活检标本取材时,应当取病变部位、病变的切缘、病变与正常组织交界处以及远离病灶的正常组织,取材时要避免挤压组织,用的刀、剪应锋利,组织的切面应当平整,大小一般在2cm×1.5cm×0.3cm。新鲜标本的保存通常在30分钟内完成,如果要进行分子生物学检测,应当严格注意无菌和时间,以避免组织内的mRNA的降解和抗原的弥散,手术标本离体后,应立即取材,并且保存在冻存管中,进行编号,带回实验室保存在液氮或-80℃的冰箱内备用。取材时组织块的大小厚薄应当适当,陈旧、腐败和干枯的组织不宜制作切片。
四、组织的固定
病理学中组织固定的主要目的是保存组织形态学特征清晰和稳定,具体包括:①抑制自溶和腐败;②保存;③硬化;④胶质物体的固化;⑤肉眼鉴别;⑥对染色的影响;⑦渗透和固定。注意事项:组织固定时,固定液的量应当充足,至少要在5倍以上,同时要注意组织块不要与容器粘连。固定不及时和固定不当的组织,染色时常出现核质着色较浅,轮廓不清,以及出现不同程度的片状发白区。
五、组织脱水、透明和浸蜡
⑴脱水:组织脱水用的各级乙醇,应当保证相应浓度,以便组织脱水彻底。无水乙醇中的组织块放置时间不宜过长。脱水乙醇,特别是无水乙醇中混有水分,则组织脱水不彻底。
⑵透明:二甲苯透明应当充分,否则不利于石蜡的浸透。
⑶浸蜡:组织在二甲苯内的时间应当严格掌握,时间不足,则石蜡不易浸透。浸蜡的温度不宜过高,时间长短也应当加以控制。
六、组织包埋
组织经过固定、脱水、透明和浸蜡等过程后,用包埋剂(石蜡、火棉胶、树脂等)将组织块包埋成块,使得组织和包埋剂相熔一体并迅速冷却,这个程序称为包埋。
1、组织石蜡包埋法
石蜡包埋法是制作光学显微镜切片的常规方法,包埋后的组织可以长期保存。包埋的方法有包埋机包埋和手工包埋两种。
2、体液石蜡包埋法
痰液、胃液、尿液、胸腔积液、腹水等可以行石蜡包埋。痰液应当选用含血液的部分或较为可疑的实体部分,滴上伊红后用皱纹纸包好,然后用10%的中性福尔马林固定,再经常规脱水,透明、浸蜡并包埋。新鲜的体液标本,倒去上层的澄清液体,将浑浊的液体放入离心管中,以转速2000-3000转每分钟离心15分钟,倒去上清液后,用10%中性福尔马林固定沉淀物,然后进行脱水透明、浸蜡、包埋。
3、冷冻干燥包埋法
新鲜组织在液氮中速冻后,先真空抽气,排除组织内的水分,然后将充分干燥的组织用甲醛蒸气固定。再将固定的组织浸入石蜡内浸蜡,最后用石蜡包埋。
六、石蜡切片技术
1、石蜡切片技术的概念
组织经石蜡包埋后制成的蜡块,用切片机制成切片的过程,称为石蜡切片技术。病理切片的厚度,一般厚度为4-6微米,常用的切片仪有轮转式石蜡切片机、平推式石蜡切片机、硬(骨)组织石蜡切片机等。
七、常规染色技术
1、苏木素-伊红染色
在组织病理学中,苏木素-伊红染色是一种日常使用最广泛的常规染色方法。常规苏木素染色的对比染色是用伊红,也有采用焰红,因为焰红比伊红色泽更鲜明,还有采用橘黄G,比布里希猩红,波尔多红等作为对比染色。
2、伊红染色
伊红是最常用的胞质染料,本身溶于醇而不溶于水,为砖红色粉末状或酱红色结晶。如果在伊红液中加入0.5ml冰醋酸,可以加速其染色过程,使得胞质的色泽更加艳丽。
精准病理诊断,从组织标本的前期处理一切开始,包括组织取材、固定、包埋、染色等各项病理技术工作。所以,我们都应把组织标本处理每一个环节规范化、标准化。
病理技术作为病理学的支撑,是病理诊断的基础。病理技术是病理工作中的重要组成部分,它贯穿从接收标本到发放病理报告整个诊断流程的始终。病理技术工作的质量直接影响到病理医生的诊断以及患者的诊断治疗效果,因此高质量的病理技术工作就显得尤为重要。
一、对送检组织标本的要求
送检组织标本在手术切除或活检后应当立即放入10%中性缓冲福尔马林溶液中固定。尸检标本应当尽量在死亡后尽早取材固定。送检组织需要全部取材的,应当在送检单上注明,有特殊要求(如细菌培养、解释道化学分析等)应当事先联系,并且在标本未固定前进行处理。
二、组织取材要求
在对送检组织标本进行详细检查的基础上,根据诊断的需要,确定取材的部位和块数。切取的组织应当按照不同的部位分别给予不同的编号或标记,以便镜检时核对。另外,尽可能在取材前对有意义的标本的表面及剖面镜下摄影,并编号存档。
三、活检标本取材要求
活检标本取材时,应当取病变部位、病变的切缘、病变与正常组织交界处以及远离病灶的正常组织,取材时要避免挤压组织,用的刀、剪应锋利,组织的切面应当平整,大小一般在2cm×1.5cm×0.3cm。新鲜标本的保存通常在30分钟内完成,如果要进行分子生物学检测,应当严格注意无菌和时间,以避免组织内的mRNA的降解和抗原的弥散,手术标本离体后,应立即取材,并且保存在冻存管中,进行编号,带回实验室保存在液氮或-80℃的冰箱内备用。取材时组织块的大小厚薄应当适当,陈旧、腐败和干枯的组织不宜制作切片。
四、组织的固定
病理学中组织固定的主要目的是保存组织形态学特征清晰和稳定,具体包括:①抑制自溶和腐败;②保存;③硬化;④胶质物体的固化;⑤肉眼鉴别;⑥对染色的影响;⑦渗透和固定。注意事项:组织固定时,固定液的量应当充足,至少要在5倍以上,同时要注意组织块不要与容器粘连。固定不及时和固定不当的组织,染色时常出现核质着色较浅,轮廓不清,以及出现不同程度的片状发白区。
五、组织脱水、透明和浸蜡
⑴脱水:组织脱水用的各级乙醇,应当保证相应浓度,以便组织脱水彻底。无水乙醇中的组织块放置时间不宜过长。脱水乙醇,特别是无水乙醇中混有水分,则组织脱水不彻底。
⑵透明:二甲苯透明应当充分,否则不利于石蜡的浸透。
⑶浸蜡:组织在二甲苯内的时间应当严格掌握,时间不足,则石蜡不易浸透。浸蜡的温度不宜过高,时间长短也应当加以控制。
六、组织包埋
组织经过固定、脱水、透明和浸蜡等过程后,用包埋剂(石蜡、火棉胶、树脂等)将组织块包埋成块,使得组织和包埋剂相熔一体并迅速冷却,这个程序称为包埋。
1、组织石蜡包埋法
石蜡包埋法是制作光学显微镜切片的常规方法,包埋后的组织可以长期保存。包埋的方法有包埋机包埋和手工包埋两种。
2、体液石蜡包埋法
痰液、胃液、尿液、胸腔积液、腹水等可以行石蜡包埋。痰液应当选用含血液的部分或较为可疑的实体部分,滴上伊红后用皱纹纸包好,然后用10%的中性福尔马林固定,再经常规脱水,透明、浸蜡并包埋。新鲜的体液标本,倒去上层的澄清液体,将浑浊的液体放入离心管中,以转速2000-3000转每分钟离心15分钟,倒去上清液后,用10%中性福尔马林固定沉淀物,然后进行脱水透明、浸蜡、包埋。
3、冷冻干燥包埋法
新鲜组织在液氮中速冻后,先真空抽气,排除组织内的水分,然后将充分干燥的组织用甲醛蒸气固定。再将固定的组织浸入石蜡内浸蜡,最后用石蜡包埋。
六、石蜡切片技术
1、石蜡切片技术的概念
组织经石蜡包埋后制成的蜡块,用切片机制成切片的过程,称为石蜡切片技术。病理切片的厚度,一般厚度为4-6微米,常用的切片仪有轮转式石蜡切片机、平推式石蜡切片机、硬(骨)组织石蜡切片机等。
七、常规染色技术
1、苏木素-伊红染色
在组织病理学中,苏木素-伊红染色是一种日常使用最广泛的常规染色方法。常规苏木素染色的对比染色是用伊红,也有采用焰红,因为焰红比伊红色泽更鲜明,还有采用橘黄G,比布里希猩红,波尔多红等作为对比染色。
2、伊红染色
伊红是最常用的胞质染料,本身溶于醇而不溶于水,为砖红色粉末状或酱红色结晶。如果在伊红液中加入0.5ml冰醋酸,可以加速其染色过程,使得胞质的色泽更加艳丽。
精准病理诊断,从组织标本的前期处理一切开始,包括组织取材、固定、包埋、染色等各项病理技术工作。所以,我们都应把组织标本处理每一个环节规范化、标准化。